李京枝1,申霞1,黄霞2,任风兰1,刘丽丽1
1.河南中医学院第一附属医院 2.河南省中医研究院
本文原载于《中医研究》2008年第1期，授权环球中医网转载，未经许可，请勿转载。
摘要 目的：探讨妇宁康颗粒治疗药物流产后出血的作用机理。方法：将怀孕SD大鼠造成药物不全流产模型,随机分为正常妊娠组、米非司酮组、新生化冲剂组、妇宁康颗粒低、中、高剂量组，分别进行在体子宫平滑肌、血清TNF-α含量观测。选昆明种小白鼠分别进行免疫器官重量、腹腔毛细血管通透性和出、凝血时间测定。结果：妇宁康颗粒能加强子宫收缩，减少妊娠组织残留；提高TNF-α含量；有延长出、凝血时间的趋势；防治宫腔或残留组织感染。结论：妇宁康颗粒具有增加子宫收缩,减少药流后阴道出血的作用。
药物流产（简称药流）即米非司酮配伍米索前列醇终止早孕的方法，目前已在临床广泛应用，但药流主要的副作用是阴道出血时间长，直接影响了广大妇女的生殖健康和生活质量。笔者结合多年临床经验，研制出妇宁康颗粒用于治疗药流后出血，取得较满意疗效，为了进一步探讨该药的作用机理，我们对它的药效进行了研究，现总结如下。
1 材料与方法
1.1 动 物
SD大鼠，普通级，雌性性成熟而未生育，体质量（220±10） g；雄性，性成熟，体质量（250±10）g。昆明种健康小白鼠，普通级，280只，体质量18～22 g，雌雄各半。均由河南省实验动物中心提供。
1.2 药物与试剂
妇宁康颗粒，由党参、黄芪、桃仁、益母草、五灵脂、血竭、当归、川芎、三七、炒蒲黄等中药组成，由河南中医学院第一附属医院药剂中心提供，批号20051107；新生化冲剂，湖南安邦制药有限公司，批号051109；米非司酮片，上海医药（集团）有限公司华联制药厂，批号060104；米索前列醇片，英国西尔（SEARLE）公司，批号051004。大鼠TNF-αELISA试剂盒，上海轩昊科技发展有限公司，批号060211。
1.3 药物不全流产模型的建立
参照文献方法[1]，将SD大鼠按雌雄比例2︰1合笼，上午8：00检查雌鼠阴栓或阴道涂片，以发现阴栓或精子的当天为妊娠第1天。随机将妊娠大鼠分为正常妊娠组、米非司酮组、新生化冲剂组及妇宁康颗粒低、中、高剂量组，共6组，每组10只。于妊娠第7天，正常妊娠组8时、18时按2 mL/100 g体重灌胃1次生理盐水，其余各组大鼠晨8时灌胃米非司酮8.3 mg/kg，18时灌胃米索前列醇100 μg/kg进行造模。
1.4 对大鼠在体子宫平滑肌的影响
妊娠第8天始，正常妊娠组和米非司酮组每天灌胃生理盐水2 mL/100 g，妇宁康颗粒低、中、高剂量组依次灌胃妇宁康颗粒39.3 ，59.0，78.8 g/kg，新生化冲剂组灌胃新生化冲剂35.4 g/kg，续7 d。
妊娠第14天，除正常妊娠组外，其余各组大鼠称重后以25％乌拉坦（l.2 g/kg）腹腔注射麻醉。固定于台上，开腹并找出一侧子宫角，轻轻剥离周围组织。在该侧子宫角选取长约2 cm的一段，将其拉过塑料筒底部橡胶膜中央的卵圆孔，用连有棉线的蛙心夹轻轻夹住。连接肌肉张力换能器，固定好麦氏浴槽，并在槽内注入36～37℃的台氏液20 mL，恒温水槽保持工作温度在（37±0.5）℃，并不断向营养液中通氧（60～80个气泡/min），待子宫收缩平稳后（约10～20 min），通过生理记录仪记录各组给药前及灌胃给生理盐水、新生化冲剂、不同剂量的妇宁康颗粒之后30,60,90 min的子宫平滑肌活动曲线。观察子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力（频率×幅度）。
1.5 对大鼠血清TNF-α含量的影响
各组大鼠于妊娠第14天测量在体子宫收缩力后，于下腔静脉穿刺取血2.0 mL，室温下静置1 h使血样凝结，然后在4℃下离心10 min，取血清，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定TNF-α含量。
1.6 对小鼠免疫器官重量的影响
将昆明种健康小白鼠70只，随机分为空白对照组、新生化冲剂组及妇宁康颗粒低、中、高剂量组，每组14只，雌雄各半。空白对照组每天灌胃生理盐水2 mL/100 g，新生化冲剂组灌胃新生化冲剂51.9 g/kg，低、中、高剂量组依次灌胃妇宁康颗粒57.7，86.5，115.4 g/kg•d。每天给药1次，连续7 d。
于末次给药后60min，将小鼠脱颈椎处死后迅速取出胸腺、脾脏，吸去血液，去除脂肪、系膜，用分析天平称取其湿重，并按以下公式计算：
胸腺指数=胸腺重量（mg）/体重（g）；
脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重（g）。
1.7 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
分组及处理同1.6。于末次给药后60 min，依灌胃顺序，每只小鼠按1 mL/100 g体重尾静脉注射0.5％伊文思蓝生理盐水溶液，随即腹腔注射0.6％冰醋酸0.2 mL。30 min后脱颈椎处死小鼠，剪开腹部皮肤肌肉，吸管吸取腹腔液，3000转/min分钟离心5 min后，取上清液于590 nm处比色测定光密度值（OD）。
1.8 对小鼠出、凝血时间的影响
分组及处理同1.6。于末次给药后60 min，分别用利剪将小鼠尾巴自距离尾尖0.5 cm处横断，待血液自行溢出时开始用秒表计时，每隔30秒用滤纸吸去血滴1次，直至血液自然停止（滤纸吸时无血）为止，计算出血时间。如小鼠出血时间长于10 min，统计时舍去。
将小鼠断尾端溢出血液，分别滴于清洁载玻片上的两端，立即开始计时，此后每隔30秒钟用干燥针头自血滴边缘挑动1次，至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间。另一滴血供复试。
1.9 统计学方法
所得数据用样本均数±标准差（ ±S）表示，用SPSS12.0软件进行统计学处理，全部数据经方差齐性分析后，组间采用单因素方差分析进行显著性检验，其中各组用药前后采用配对t检验进行显著性检验，P＜0.05判断数据有统计学意义。
2 结 果
2.1 对大鼠在体子宫收缩频率的影响
妇宁康颗粒中、高剂量组能明显增加大鼠在体子宫收缩频率（P＜0.05或P＜0.01）。见表1。
表1 妇宁康颗粒对大鼠在体子宫收缩频率的影响（x±S，次/min）
注：与米非司酮组对比，* P＜0.05，** P＜0.01。
2.2 对大鼠在体子宫收缩幅度的影响
妇宁康颗粒中剂量组给药后30，60及90min能显著增加子宫平滑肌收缩幅度（P＜0.01）。见表2。
表2 妇宁康颗粒对大鼠在体子宫收缩幅度的影响（ ±S，mm）
注：与米非司酮组比较：* P＜0.05 ** P＜0.01；与给药前对比，# P＜0.05 ，## P＜0.01。
2.3 对大鼠在体子宫活动力的影响
妇宁康颗粒中剂量组给药后30，60分钟能显著增加子宫平滑肌收缩活动力（P＜0.05，P＜0.01）。见表3。
表3 妇宁康颗粒对大鼠在体子宫收缩活动力的影响（x±S）
注：与米非司酮组对比，* P＜0.05， ** P＜0.01；与给药前对比，# P＜0.05 ，## P＜0.01。
未完待续, 本文原载于《中医研究》杂志2008年第1期，授权环球中医网转载，未经许可，请勿转载。
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