| 名医在线 低密度脂蛋白受体相关蛋白基因两种多态性与阿尔茨海默病的关系 中华神经科杂志 2000年第1期第33卷 论著摘要 作者：毕胜 王德生 张昱 吴江 盛雨辰 韩辉 王守春 孔繁军 单位：毕胜（150001 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科）；王德生（150001 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科）；盛雨辰（150001 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科）；韩辉（150001 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科）；张昱（白求恩医科大学第一临床医学院神经内科）；吴江（白求恩医科大学第一临床医学院神经内科）；王守春（白求恩医科大学第一临床医学院神经内科）；孔繁军（白求恩医科大学第一临床医学院神经内科） 关键词： 阿尔茨海默病；受体；免疫；载脂蛋白e类；基因 摘 要：目的 探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白(lrp)基因两种多态性与阿尔茨海默病(alzheimer disease，ad)的相关情况。方法 应用分子生物学技术，在42例患者和40名正常人中观察lrp基因、apoe基因多态性的分布，进行关联分析。结果 ad与lrp基因上游区域5′端插入序列多态性无关联；ad与lrp基因外显子3多态中的等位基因c正关联(rr=2.362， p＜0.05)，与基因型c/c正关联(rr=2.710，p＜0.05)；ad与apoe基因ε4等位基因正关联(rr=3.194，p＜0.01)，与ε4/3基因型正关联(rr=3.148，p＜0.05)，但与ε4/2基因型无关；无apoe ε4等位基因的ad与lrp c/c基因型正关联(rr=6.842，p＜0.05)，有apoe ε4等位基因的ad患者与lrp c/c基因型无关联(rr=1.857，p＞0.05)。结论 apoe ε4是ad发病的风险因子；lrp基因多态性与ad正关联是由于lrp基因c/c型在患者中过表达所致；lrp基因c/c型是无apoe ε4的ad患者发病的风险因子。 two polymorphisms in the lrp gene and alzheimer′s disease bi sheng wang desheng, zhang yu et al. （department of neurology, the first clinical college of harbin medical university, harbin 150001, china） abstract：objective to examine the asssociation of two low-density lipoprotein receptor-related protein (lrp) gene polymorphisms with sporadic late-onset alzheimer′s disease(ad).methods the two polymorphisms in the lrp gene were genotyped in 42 ad cases and 40 controls with molecular biological methods. the apolipoprotein e (apoe) gene polymorphism was also genotyped.results there was no association between ad and the tetranucleotide polymorphism; ad was associated with allele c (rr=2.362， p＜0.05) and genotype c/c (rr=2.710，p＜0.05) for the lrp exon 3 polymorphism; ad was associated with apoe ε4 (rr=3.194，p＜0.01) and genotype ε4/3(rr=3.148，p＜0.05); there was association between ad without apoe ε4 and lrp c/c genotype (rr=6.842，p＜0.05).conclusions the apoe ε4 is a risk factor of ad; the ad is associated with lrp exon 3 polymorphism because of over-represented c/c genotype of lrp gene; c/c genotype of lrp gene may be an independent risk factor of ad patients without apoe ε4. keywords：alzheimer′s diseases; receptors, immunogic; apolipoproteins e; genes▲ 载脂蛋白e(apoe)基因决定阿尔茨海默病(alzheimer disease，ad)发病的遗传易患性，但其分子生物学机制目前还不清楚。apoe的主要受体是低密度脂蛋白受体相关蛋白(lrp)，且lrp与apoe及淀粉样前体蛋白(app)共存于ad的病理特征老年斑中，并调节着二者的代谢。因此，lrp作为ad的一个候选基因受到了普遍关注。目前尚未发现lrp基因存在着诱发ad的错义突变，但位于lrp基因5′端上游区域插入序列和外显子3存在着遗传多态。我国尚未见这方面的报道。为此，我们对ad患者lrp基因两种多态性及apoe基因多态性进行了初步研究，现将结果报道如下。 资料和方法 一、资料 所有病例由哈尔滨医科大学一院和白求恩医科大学一院提供。诊断根据简易精神状态检查表(mmse)，长谷川痴呆量表初筛作出痴呆的诊断，再采用美国国立神经病语言机能紊乱和卒中研究所及阿尔茨海默病和相关疾病协会(nincds-adrda)标准作出ad诊断。以健康老年人为正常对照。本研究含ad患者42例，其中男23例，女19例，年龄60～79岁，平均(70.4±6.6)岁；对照组40名，男24名，女16名，年龄60～81岁，平均(68.1±4.3)岁。两组研究对象均为随机选择，无血缘关系。 二、方法 1. 基因组dna的提取：按常规方法提取外周血白细胞基因组dna。 2. lrp基因5′端上游区域插入序列多态性检测［1］：引物为：5′-tgtaaggtgagagaatg-cata-3′和5′-tgggca- acaagagtgcaactcca-tc-3′。pcr条件：94℃3 min，35次循环(94℃ 30 s，56℃ 30 s，71℃ 60 s)，70℃ 5 min。取pcr产物10 μl，12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，固定，银染，显色，根据电泳带型确定基因型（图1）。 1，3：纯合基因型a1/a1(91 bp/ 91 bp)；2：纯合基因型a2/a2 (87 bp/87 bp)；4：杂合基因型 a1/a2(91 bp/87 bp)；m：核苷 酸分子量标准pbr322/msp i dna marker 1 lrp基因5′端上游区域 插入序列多态性检测结果 3. lrp基因外显子3多态性检测［2］：引物为：5′-ggggtccaggactg- catgta-3′和5′-aa-gtccgtacctcggc- agtg-3′。pcr条件：94℃ 3 min，32次循环(94℃ 30 s，54℃ 30 s，72℃ 30 s)，72℃ 3 min。取pcr产物5 μl，加5 u rsai内切酶，37℃酶切过夜，12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，固定，银染，显色，根据电泳带型确定lrp基因型（图2）。 1：纯合基因型t/t(51 bp/51 bp)；2： 纯合基因型c/c(32 bp/32 bp)；3：杂 合基因型c/t(32 bp/51 bp)；4：pcr 产物(分子量大小为59 bp)；m：核苷 酸分子量标准pbr322/hae iii dna marker 2 lrp基因外显子3多态性检测 结果 4. apoe基因型检测［3］:引物：5′-tccaaggagctgcaggcggcgca-3′和5′-acagaattcgccccggcctggtacactgcca-3′。pcr条件：95℃ 5 min，35次循环(94℃ 30 s，65℃ 30 s，72℃ 90 s)，72℃ 5 min。取pcr产物10 μl，加20 uhhai内切酶，37℃酶切过夜，10%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，固定，银染，显色，根据电泳带型确定apoe基因型（图3）。 |
